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伪狂犬病病毒PK基因缺失转移载体的构建及表达
摘要
病毒
伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pseudorabiesPRV)引起的家畜和各种野生动物。
发烧,瘙痒,呼吸和神经系统疾病,以怀孕母亲为特征的急性感染
猪会引起死产或流产,这是一种危害养猪业的重要感染。
PRV为疱疹病毒
它具有庞大的基因组和许多不重要的区域,它具有很大的外源基因表达潜力,它被认为
它是活疫苗的理想载体。
PRV蛋白激酶(PK)基因不是PRV增殖和体外复制所必需的
基因是病毒神经毒性的重要组成部分。
通过诱变或基因工程技术灭活PK基因
之后,病毒的毒力大大降低,但其免疫原性不会改变,因此PK基因是一个额外的基因。
它是理想的插入区域之一。
在该实验中,使用伪狂犬病病毒的TK / gl缺失疫苗株作为亲本菌株来提取病毒基因组DNA。
核酸内切酶Asc
分裂基因组以获得含有完整PK基因的8.7kb片段并克隆该片段
矢量pPolyII Asc
从多克隆位点I获得中间载体P8_AA。
限制酶sph
我+ Nde
缺失PK基因的质粒P8-a 2218bp,将质粒插入缺失区域。
在pEGFP_G中含有绿色荧光蛋白基因和狂犬病病毒糖蛋白基因(G)的完整表达盒。
去除质粒后,将PK基因克隆到其去除位点的完整EGFP基因表达盒中以构建通用转基因。
转移载体质粒P8-EGFP(阳性)和P8-EGFP-r(反向)。
在平板上进行瞬时转染以观察绿色荧光蛋白的表达,结果是质粒pEGFP.C1,pEGFP.G。
因此,其表达作为通用转移载体是可行的,并且可用于同源重组。
它还显示了质粒。
P8-EGFP和P8。EGFP-G两侧同源重组臂中的负调控序列直接抑制质粒
关于负调控序列的位置和机制,尚未研究EGFP基因的表达。

PRV
来自TK缺陷型疫苗株的基因组DNA和转移载体P8-EGFP-Gr
精细PK-15 DNA的共转染
在损伤出现后,在荧光显微镜下观察到绿色荧光,并在三个平板上纯化平板克隆。
组病毒,重组病毒称为PRv-PK-_G。
关键词:假狂犬病毒。PK基因;转移载体
建设和重组PRV
爆炸
矢量
PKGeneDdetedTransfer
摘要
这种疾病是一种急性感染,是细菌的一种特征
来自奥斯基
传染性肝炎和其他动物的狗
很多系统
狂犬病的原因
病毒(PRV)isagentA eszky的dlsease,VI,hich
内分泌学主要
Proteinoneof
显着性类型Bansuri激酶基因(PK)
结合Vifulemofandises情感公关
基因PRVitof
传播


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